蛹虫草母种培养新技巧应用

　　农业中的种植技巧是农也工作人员都会想去学好的一个方面，当然了这得有人员的指导和实验的介绍等，以下是对于蛹虫草母种培养基配方优化上的一个介绍。

　　摘要：蛹虫草母种培养基的研究已有一些报道,但所述培养基各有不同,产量与品质也高低不一,这种情况严重影响其产业发展。在蛹虫草的母种培养中,培养基的配方是否优良,直接影响菌丝体的生长。因此,对蛹虫草母种培养基进行优化研究,筛选出适合蛹虫草菌丝体生长的最佳母种配方具有一定的理论与实际意义。

　　关键词：蛹虫草,种植养殖,农业类论文

　　1 材料和方法

　　1.1 菌 种

　　蛹虫草试管母种由华中农业大学微生物教研室提供。

　　1.2 主要仪器

　　不锈钢立式压力蒸汽灭菌器,上海申安医疗器械厂生产,型号:LDZX-30FB;超净工作台,苏净集团安泰公司制造,型号:SW-CJIFD;恒温培养振荡器,天津市欧诺仪器仪表有限公司生产,型号:HNY-2102。

　　推荐期刊：《农学学报》(月刊)是经新闻出版总署2010年12月3日批准，中国农学会主办的高水平学术性期刊。

　　1.3 培养基设计

　　根据蛹虫草生长所需营养条件及不同研究人员提供的最佳配方确定。

　　1.3.1 配方1 葡萄糖10 g、蛋白胨10 g、琼脂20 g、MgSO4 0.3 g、KH2PO4 0.5g 、VB1(50 mg·L-1)、蒸馏水1 L、pH值5~6。

　　1.3.2 配方2 葡萄糖10 g、牛肉膏10 g、琼脂25 g、MgSO4 0.6 g、KH2PO4 2 g、乙酸钠5 g、柠檬酸二胺2 g、MnSO4 0.25 g、吐温80 mL、酵母粉5 g或酵母膏10 g、蒸馏水1 L、pH值6.2~6.4。

　　1.3.3 配方3 蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、琼脂17 g、NaCl 5 g、蒸馏水1 L、pH值7.2左右。

　　1.3.4 配方4 葡萄糖10 g、琼脂20 g、MgSO4 1 g、KH2PO4 1.5 g、VB1(50 mg·L-1)、CaCO3 1 g、蒸馏水1 L、pH值5~6。

　　1.3.5 配方5 葡萄糖15 g、柠檬酸铵 2.5 g、琼脂20 g、乙酸钠5.5 g、MgSO4 0.65 g、MnSO4 0.3 g、KH2PO4 1.5 g、蒸馏水1 L、pH值自然。

　　1.3.6 配方6 20%马铃薯提取液中加入1%葡萄糖、1%蛋白胨、2%琼脂、0.5%KH2PO4、0.3%MgSO4、VB1(10 mg·L-1)、蒸馏水1 L、pH值5.8。 1.4 方法步骤

　　1.4.1 培养基制备、分装与灭菌 按培养基制备的常规技术,分别制作以上6种配方培养基。配方中有马铃薯者,将马铃薯削皮、去掉芽眼切块(0.5 cm×1 cm),称质量。置沸水中煮30 min,用4层纱布过滤挤压取其汁液至于烧杯中,同时加入琼脂及其它药品搅拌使其充分溶解,加水定容至1 L,测定并调整酸碱度。将制备的培养基分别装入试管中,装量为管高的1/4。每种配方装6支试管,塞上棉塞封口,捆扎。在压强1.14×105 MPa、温度120 ℃下高压灭菌30 min后,待高压锅的气压降至0,将试管取出冷却并搁置斜面,然后将其放入28~30 ℃室温中培养48 h进行无菌检验。检查完毕将其置于超净工作台中备用。

　　1.4.2 接种与培养 接种前将母种菌株搁置在恒温箱中活化1 d,然后菌种移入接种室,在超净工作台中按无菌操作要求,向试管斜面中央接种,接种块大小为5 mm×25 mm。注意接种块不要碰到其它部位,以免影响菌种萌发后菌丝体的观察。每种培养基配方接6支试管。接种后移入恒温箱中培养,培养条件为18.5~19 ℃,无光照。接种后每2 d记录菌落形成及菌丝生长情况。

　　1.4.3 测定菌丝长速 菌丝长速是菌丝生长的指标。将菌丝接种到斜面培养基中,每天测量1次菌落直径,直至菌落满管为止。观察并记录每种配方6支试管中菌丝的生长情况,重复3次取其平均值。

　　1.4.4 统计满管天数 满管天数是菌种接种到斜面培养基上,到菌丝布满斜面所需要的时间。观察并记录每种配方6支试管的满管时间,重复3次取其平均值。

　　1.4.5 观察菌种初萌发天数 从菌种接种到培养基上开始观察,到接种块周围长出白色绒毛状菌丝体,这段时间为菌种初萌发时间。从接种开始,每24 h观察并记录每种配方6支试管中菌种的萌发情况,重复3次取其平均值。

　　1.4.6 观察菌丝长势 菌丝长势是评价菌丝生长情况的重要指标。以菌丝的洁白程度、生长健壮程度、菌丝浓密程度、菌台厚度为指标,观察并记录每种配方6支试管中菌丝的长势。观察结果用很强、强、较强、弱4个等级表示。

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