人体血液中乙醇测定方法探析

来源：职称论文发表咨询网作者：赵编辑时间：2019-08-09 09:20

　　摘要：自我国新的刑法修正案颁布实施将醉酒驾驶机动车纳入刑事犯罪以来，机动车驾驶人员体内血液中乙醇的测定成了此类案件定罪量刑的关键证据。而人体中乙醇的检测方法也会直接影响最终结论。为此，本文主要探析目前常用的几种血液中乙醇检测方法，以期能对今后人体血液乙醇检测的研究提供参考和借鉴。

　　关键词：乙醇毒物分析技术毒理学顶空气相色谱法

人体血液中乙醇测定方法探析

　　乙醇也称酒精，是各种酒类饮料的主要成分。乙醇在人体内主要经过胃和小肠代谢，在0.5~3h内可完全被人体吸收。乙醇进入人体后，95%~98%经会通过肝代谢先被氧化成乙醛，再进一步被氧化成乙酸，其余部分2%~5%，主要以原体形态的由尿液呼气和汗液排出体外。大量饮用高浓度酒会造成急性酒精中毒，严重者会危及生命健康。同时，饮酒过量也会对社会造成较大危害，如酒后驾车造成的交通事故。

　　1 化学法

　　lieben碘仿反应，是有机分析上常用的化学反应方法。碘仿反应常被用来测定新合成的化合物结构特点和鉴别未知物成分结构的主要方法。碘仿是一种难溶于水的黄色固体，具有特殊臭味，作为鉴别比氯仿和溴仿好并且反应非常灵敏。其在为乙醇检测的原理是在碱性条件,碘可以氧化乙醇。乙醇和碘反应生成碘仿，浅黄色沉淀。也可用碘和氢氧化钠溶液来鉴别乙醛或甲基酮。

　　此外，还有conway法(微量扩散法)在液体检材中，加入适量饱和碳酸钠溶液作为乙醇释放剂，促使检材中的乙醇挥发。用重络酸钾——硫酸溶液吸收气相中的乙醇蒸气，并把乙醇氧化成乙酸再通过自身吸收剂的颜色反应来判断检材中是否含有乙醇。此外还有可以作为乙醇定性的检测方法，如vitali反应，主要采用氢氧化钾和二硫化碳及钼酸铵溶液的颜色反应鉴别，灵敏度为1∶100。化学法总体操作简便，成本较低，对实验室要求不高，容易普及，但是化学法灵敏度相对较低，易受外界环境因素的影响，准确性低。

　　2 酶法

　　酶法自动分析目前已经广泛使用，常用的酶学测定法有两种，分别是ADH法及乙醇氧化酶法，其原理为选用三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸作为缓冲体系，乙醇在乙醇脱氢酶催化作用下转化成乙醛，并生成还原型辅酶Ⅰ。用吸光度法检测340nm波长处的变化，同时对照参考值标准得到乙醇的浓度值。乙醇氧化酶法，其试剂组成较为简易，不足之处是检测的特异性弱，特别是甲醇对检测过程的干扰大，易出现假阳性。ADH法相对特异, 受到甲醇或异丙醇等物质的干扰细微，并且ADH相对更容易获取，成本较低。目前，已有此类商品化试剂盒供应，检测方便快捷。酶法的不足之处在于对于反应温度条件比较苛刻，易受其他化学类物质的干扰。

　　3 气相色谱法

　　顶空气相色谱法是在气相色谱仪进样口前面增加一个顶空进样装置的一种色谱化学成分检测分析技术。常解释为将顶空进样器与气相色谱仪联用的仪器。用于分析易挥发的微量成分，如对甲醇、乙醇等挥发性有机溶剂。顶空气相色谱法目前主要用于我国交通事故驾驶人员及肇事人员血液中酒精定性定量确证分析，以及中西医药投入市场前对其残留物品的检测分析、司法案件中有毒气体和挥发性毒物的认定分析等，它可以将被测样品 (气-液和气-固)加热平衡后，提取其中挥发气体部分进入气相色谱仪。具有操作方法简单、过程迅速、分析结果准确可靠的特点。

　　采用顶空气相色谱法，可直接对血料中的乙醇定性定量检测。国家公安部司法部已颁布相应的检测技术规范，也是现行推广和使用较多的方法之一。其原理是利用乙醇的易挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测，并与平行操作的乙醇对照品进行比较分析，以保留时间进行定性分析;以峰面积为依据，用内标法进行定量分析。色谱法是一种物理或物理化学分离分析方法。

　　该方法操作简单易行，稳定性好，杂质干扰小。相对直接气相色谱法，大幅减少了对色谱柱的损害，同时也无需进行复杂的样品提成与纯化，从而大大降低分析的成本，提高精准度和精密度。但是，在操作过程中也要注意确保顶空平衡温度及平衡时间的一致性，这直接关系到分析测定的准确可靠性。

　　4 色-质联用法

　　自1957年J.C.Holmes和F.A.Morrell首次实现气相色谱和质谱联用以后，这个技术的发展日新月异。气质联用法是同时将气-液色谱和质谱的特点结合起来，用于确诊被检样本中不同物质定性和定量的检测分析途径，其具有 GC的高分辨率和质谱的高灵敏度。气相色谱是把混合样本中的不同成分，按时间分离出来，而质谱则给出的是每个组分结构的具体信息。在所有联用技术中气质联用(即 GC/MS)的发展最为完善，应用最为广泛。现在从事化学分析和毒物分析的实验室及检测机构都把GC/MS法作为检测定性分析的核心技术手段之一，同时GC/MS也被用于定量分析。另一方面，目前市面上销售的有机质谱仪、傅立叶变换质谱(FTMS)、离子阱质谱，还有飞行时间质谱(TOF)，磁质谱、四极杆质谱等分析仪器，均能和气相色谱联用。还有一些其他的气相色谱和质谱连接的方式，如气相色谱-燃烧炉-同位素比质谱等。当前色-质联用法已经成为检测分析复杂混合物最为有效的手段之一。气相色谱和质谱由接口相连。气质联用法普遍运用于药品的检测、毒物的分析、生物样品中药物与代谢产物定性定量分析及未知样品成分的确定。气-质谱联用法结合了色谱定量和质谱定性的所有优秀性能特点，快捷灵敏，特异性强，已普遍运用于易挥发性有机物的检测和分析，但是该方法检出限比不上顶空气相色谱法而且气相色谱质谱仪比较昂贵，维护保养麻烦，不能普及使用。

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　　在人体血液中乙醇的测定工作中，由于使用分析设备检测方法，检测人员测量环境以及被检样本的不同，产生得测量结果通常存在不确定性。因此，仍需要进一步的研究和发展。

　　参考文献

　　[1] 廖林川 . 法医毒物分析 [ M ] . 北京 :人民卫生出版社,2018:122-127.

　　[2] 欧阳运富,唐宏兵,吴英,等.血液中乙醇含量测定方法的探讨与改进[J].理化检验(化学分册),2015,51(7):981- 983.

　　[3] 吴胜.血液中乙醇检测方法的探讨[J].中国卫生检验杂志,2013,23(16):3316-3318.

　　[4] 罗赟,岳蕴瑶,李大春.血液中乙醇含量测定方法的研究 [J].中国卫生检验杂志,2010,20(8):1897-1898.

　　[5] 黄诚,卢丽明,刘国平.内标法和外标法测定血液中乙醇含量的比较分析[J].生命科学仪器,2008(3):41-43.

　　[6] 李世杰,郑雯,冯其光.血液中乙醇浓度检测方法[J].预防医学情报杂志,2007(1):124-126.

　　[7] 朱德全,庞华,黎锦荣.体内乙醇含量测定结果的法医学评价[J].法医学杂志,2006(1):84-87.

　　[8] 柳畅先 ,陈勇.乙醇含量的酶法测定[ J ] .分析测试学报,2003(4):96-98.

　　[9] 胡建强,刘凤兰.血清乙醇脱氢酶活性测定及临床应用 [J].天津医科大学学报,2001(1):110-111.