清蒸大黄的炮制及其五种游离蒽醌的含量测定分析

　　摘要：采用ＨＰＬＣ法测定清蒸大黄中的５种游离蒽醌的含量。色谱柱为ＴｈｅｒｍｏＢＤＳＨＹＰＥＲＳＩＩＣ１８柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），以甲醇－０．１％磷酸（７６∶２４）水溶液为流动相，检测波长为２５４ｎｍ，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３０℃，进样量１０μＬ。结果表明，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在０．０２０７~０．４１４０μｇ（R２＝０．９９９９）、０．１７２１~３．４４２０μｇ（R２＝０．９９９６）、０．０２０３~０．４０６０μｇ（R２＝０．９９９９）、０．１４８０~２．９６００μｇ（R２＝０．９９９８）、０．１６４０~３．２８００μｇ（R２＝０．９９９３）的线性范围内呈良好线性关系，说明该方法可作为大黄及其不同炮制品的质量控制方法。

　　关键词：清蒸大黄；游离蒽醌；炮制；高效液相色谱法

　　大黄属中药泻下药，始载于《神农本草经》，历代本草均有收载。大黄为蓼科植物掌叶大黄（RｈｅｕｍｐａｌｍａｔｕｍＬ．）、唐古特大黄（RｈｅｕｍｔａｎｇｕｔｉｃｕｍMａｘˉｉｍ．ｅｘＢａｌ?．）或药用大黄（Rｈｅｕｍｏ??ｉｃｉｎａｌｅＢａｉll．）的干燥根和根茎［１］。掌叶大黄和唐古特大黄被称为北大黄，主产于青海和甘肃等地；药用大黄称为南大黄，主产于四川、陕西等地［２］。中国有大黄４５个品种和２个亚种，但２０１５版《中国药典》只收录３种大黄，即正品大黄、唐古特大黄和药用大黄的干燥根及根茎，主要有效成分有芦荟大黄素、大黄素、大黄酸大黄酚、大黄素甲醚、没食子酸、番泻苷类、鞣质、大黄多糖和微量元素等［３，４］。大黄性苦、寒，归脾、胃、大肠、心、肝经，药理作用广泛，如泻下、消炎、抗菌、抗病毒、利胆、止血、降血脂、降血压等［５，６］。

　　１材料与方法

　　１．１仪器

　　Ｗａｔｅｒｓ２６９５高效液相色谱仪，包括２４８９ＵV、四元泵、真空脱气泵、自动进样器、柱温箱和Ｅｍｐｏwｅｒ３液相工作站；ＰＲＡＣＴＵM２２４－ＫＮＳＯＰ电子分析天平［赛多利斯科学仪器（北京）有限公司］；ＨＷＳ－２６电热恒温水浴锅（上海齐欣科学仪器有限公司）。

　　１．２试剂

　　甲醇，色谱纯（美国Ｆｉｓｈｅｒ科学世界公司）；甲醇、乙醇，分析纯（国药集团化学试剂有限公司）；醋酸镁（国药集团化学试剂有限公司）；磷酸（国药集团化学试剂有限公司）；超纯水，其他试剂均为分析纯。芦荟大黄素（批号：１６０５２０）、大黄酸（批号：１７０２１９）、大黄素（批号：１７０２２４）、大黄酚（批号：１６０１２４）、大黄素甲醚（批号：１６０６０２），纯度＞９８％，均购于上海融禾医药科技有限公司。

　　２结果与分析

　　２．１色谱条件按照“１．３．２”色谱条件，各组分分离度良好（图２）。

　　２．２线性关系考察分别精密吸取大黄混合对照品溶液１、２、５、８、１２、１５、２０μＬ注入液相色谱仪，测定峰面积，分别以峰面积和进样量（μｇ）为纵坐标和横坐标，绘制标准曲线并计算回归方程。精密吸取上述大黄混合对照品稀释液进样，测定其信号（以峰高计算）与噪声比值，将S／Ｎ＝３时的浓度定为检测限（LＯD），将S／Ｎ＝１０时的浓度定为定量限（LＯＱ）。各组分在各自的含量范围内线性关系良好（表１）。

　　３讨论

　　３．１流动相的选择

　　试验采用ＨＰＬＣ测定大黄游离蒽醌类成分，对其流动相进行了考察，发现流动相中加入不同种类的酸对５种游离蒽醌的分离有较大影响。本试验采用甲醇－０．１％磷酸溶液、甲醇－０．２％磷酸溶液、甲醇－０．１％冰醋酸溶液、甲醇－０．２％冰醋酸溶液和甲醇－０．１％冰醋酸溶液等流动相进行比较，结果表明，甲醇－０．１％磷酸溶液（７６∶２４）作为流动相，５种游离蒽醌分离效果较好，与杂峰达到基线分离。

　　３．２炮制品与其对应的药理相关性分析

　　在蒸制的过程中，蒸气加热，温度高，破坏了主要泻下成分的结合型大黄酸，使其泻下作用下降；而大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量的增加，抑制血小板凝集作用，降低血小板活性，凝集状态得到改善，渗透压趋于正常。因此，清蒸大黄相对于生大黄来说，活血祛瘀的功效更好。生大黄经炮制后，其药效发生了改变，治疗范围扩大［１３－１５］。同时，经过蒸制，清蒸大黄对胃肠道刺激较生大黄有所下降。不同的中药炮制方法产生不同的炮制品，其治疗效果也会产生差异，所以临床上要辨证施治。

　　参考文献：

　　［１］康延国．中药鉴定学［M］．北京：中国中医药出版社，２０１２．７２－７３．

　　［２］黄兆胜．中药学［M］．北京：人民卫生出版社，２００２．１３７．

　　［３］容悦莹，冯素香，吴纯伟，等．大黄化学成分的药动学及其代谢的研究进展［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１６（１０）：１９９－２０３．

　　［４］国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［M］．北京：中国医药科技出版社，２０１５．

　　［５］傅兴圣，陈菲，刘训红，等．大黄化学成分与药理作用研究新进展［Ｊ］．中国新药杂志，２０１１（１６）：１５３４－１５３８，１５６８．

　　［６］范妙漩，赵海誉，王一涛，等．中药大黄现代药理学研究与中西医结合的应用［Ｊ］．中国医药指南，２００９（４）：７－８．

《清蒸大黄的炮制及其五种游离蒽醌的含量测定分析》

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