农业职称论文刊发浅析靖江香沙芋组织培养

来源：职称论文发表咨询网作者：职称论文时间：2015-05-18 15:36

　　摘要：以靖江香沙芋茎尖为外植体进行快速繁殖技术研究。结果表明，75%乙醇浸泡30 s和84消毒液消毒10～15 min配合使用灭菌效果最好;芽诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L TDZ，培养25 d后芽诱导率最高，为80%，芽高度为2.3 cm;继代增殖最适培养基为MS+1.0 mg/L TDZ，月增殖倍数可达4.3;生根培养最适培养基为1/2MS+01 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.02%活性炭，平均生根时间为11 d，生根率达100%，根系最长为2.9 cm;生根培养45 d，将试管苗移入营养土中生长，30 d后移栽成活率达100%。

　　关键词：靖江香沙芋;组织培养;芽诱导;快繁

　　靖江香沙芋属天南星科(Araceae)芋属(Colocasia) 多子芋类型，是靖江市农民栽培的芋类作物当家品种。其块茎中淀粉含量高，既可以当粮食，又可做蔬菜，是老幼皆宜的滋补品，并含有多种维生素，有一股独特的香味。加工前景广阔，闻名并畅销广西、广东及港、澳地区。靖江香沙芋通常采用母芋留种方式进行繁殖，种性退化问题较为突出，抗病性和抗逆性减退。建立靖江香沙芋组培再生体系，不仅有利于品种的更新复壮，更可为种苗工厂化生产和新品种选育提供技术支持与储备。

　　近年来，芋组织培养已相继开展，对其茎尖和叶片等不同外植体培养进行了广泛的研究[1-5]。但这些研究主要围绕外植体愈伤诱导及植株再生，而愈伤诱导过程中易发生变异，不利于保持本品种的优良特性。本研究旨在建立一种从芽直接到多芽体，多芽体到试管苗的繁殖方式。这种繁殖方式不仅可以提高繁殖系数和繁殖速度，而且利于保持本品种的优良特性，可有效保护具有地方特色的种质资源。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　供试材料为靖江香沙芋芋茎尖。

　　1.2方法

　　1.2.1无菌材料的处理选取保存完好、无腐烂斑点的芋，经0.2%的K2MnO4消毒5 min后整齐排列在周转箱中，用沙子覆盖到整个芋块的2/3处，放置到光照培养箱中催芽。待芽生长到1～3 cm时切取茎尖，剥除外层2～3层叶片，流动水冲洗10 min，在超净台上用75%乙醇浸泡30 s，分别用NaClO、84 消毒液2种消毒剂，NaClO设10、15、20 min，84消毒液设5、10、15 min 3个时间段处理灭菌，每种处理分别接种12个茎尖于MS培养基中，观察灭菌效果。

　　1.2.2芽诱导分化外植体经灭菌后接种在添加不同浓度的6-BA和NAA及TDZ和IBA组合的MS培养基中，接种25 d后比较芽的分化率、芽高度及叶片数等确定适宜芽分化的培养基。激素浓度设置7个处理，每个处理设3次重复，每次重复接种15个茎尖。

　　1.2.3继代增殖诱导培养基上萌发出的不定芽长到2 cm左右时，切取单芽接种在添加不同浓度的6-BA和NAA及TDZ和IBA组合的MS培养基中，30 d时观察其增殖倍数。激素浓度设置6个处理，每个处理设3次重复，每次重复接种20个单芽。

　　1.2.4生根将高2.0 cm以上、带有2张或2张以上叶的健壮小苗切下，转入生根培养基中培养。生根基本培养基为1/2MS并添加0.02%活性炭。调查不同处理的平均生根时间，30 d的生根数、生根率、叶片数、根系平均长度及根系形态。生根培养基设置4个处理，每个处理设3次重复，每次重复接种15个小苗。

　　1.2.5炼苗与移栽生根培养45 d的再生苗在室外常温下放置5 d后，打开瓶盖炼苗1～2 d。将根系发达、株高5～12 cm 的再生苗从培养瓶中取出，洗去根部的培养基，移栽到营养土中，并置于相对湿度80%～90%、温度20～25 ℃的环境中遮阴培养1周，2周后正常光照培养，30 d时统计成活率。

　　1.2.6培养基灭菌及培养条件高压灭菌前调整培养基pH值为5.8，保持121 ℃灭菌20 min。培养室温度为(25±2) ℃，光照度2 000～3 000 lx，每天光照12 h。培养基中琼脂的质量分数为7 g/L，蔗糖质量分数为30 g/L。

　　2结果与分析

　　2.1不同消毒液和灭菌时间对外植体灭菌效果的影响

　　从表1可以看出，外植体用84消毒液灭菌10～15 min效果最好，灭菌成功率达83.3%以上。NaClO灭菌成功率远远低于84消毒液。

　　表1不同消毒液和灭菌时间对外植体灭菌效果的影响

　　消毒剂种类时间

　　(min)接种茎段数

　　(个)污染数

　　(个)污染率

　　(%)NaClO1012650.01512433.32012325.084消毒液512650.01012216.7151218.3