儿童EB病毒感染不同临床疾病类型免疫功能研究

　　摘要：目的了解EB病毒（EBV）感染患儿不同临床疾病类型与其免疫功能的关系。方法收集2010年10月至2012年4月湖南省儿童医院内科收治的111例EBV感染患儿，按临床疾病类型分为４组：普通传染性单核细胞增多症（IM）组47例；重症IM组35例；慢性活动性EBV感染（CAEBV）组10例；EBV相关噬血淋巴组织细胞增多症（EBV-HLH）组19例。同时选择正常儿童32例作为对照组。采用散射比浊法检测血清免疫球蛋白和补体，采用流式细胞仪检测法检测外周血外周血淋巴细胞分化抗原CD4、CD8、CD4/CD8、CD16+56（NK）表达率。结果（1）CAEBV组、EBV-HLH组的C3、C4水平明显低于其余３组，且后者与其余３组差异有统计学意义（P＜0.01）；CAEBV组IgE水平高于其余4组，差异有统计学意义（P＜0.01）；EBV-HLH组IgA、IgG水平显著低于其余4组，差异有统计学意义（P＜0.01）。（2）普通IM组及重症IM组CD8+比值较其他3组显著升高（P＜0.01）；EBV-HLH组的总T细胞、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK及B细胞均显著下降，差异与其余4组比较有统计学意义（P＜0.01）；CAEBV组CD4+/CD8+较其余3组EBV感染患儿升高，与对照组差异无统计学意义，B细胞较普通IM组及重症IM组、对照组降低（P＜0.05）。结论儿童EBV感染不同疾病类型与机体细胞免疫反应相关，EBV引起的严重器官功能损伤与机体免疫失衡有关，可能尤其与CD4+及B细胞降低显著相关。体液免疫降低的程度可能会提示疾病预后。

　　关键词：EB病毒；细胞免疫；体液免疫；儿童

　　EB病毒（Epstain-BarrVirus，EBV）感染的临床表现及转归与EBV-DNA病毒量及机体免疫功能有关。有文献报道，血浆或血清中的游离EBV-DNA与器官损害程度、疾病种类、疾病严重度及病死率呈正相关［3-4］，机体细胞免疫功能变化可提示疾病转归及预后。本文对EBV感染患儿不同临床疾病类型及其免疫功能的关系进行了研究，现报告如下。

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　　1资料与方法

　　1.1临床资料

　　病例来自2010年10月至2012年4月湖南省儿童医院内科收治的111例EBV感染患儿，其中男62例，女49例。年龄8个月至15岁，中位年龄4.03岁。根据EBV感染的不同临床类型将111例患儿分为以下4组：普通传染性单核细胞增多症（IM）组47例；重症IM组35例；慢性活动性EBV感染（CAEBV）组10例；EBV相关噬血淋巴组织细胞增多症（EBV-HLH）组19例。另选择同期在湖南省儿童医院儿保科体检的32例正常儿童为对照组，其中男21例，女11例；年龄2～14岁。这５组患儿的性别、年龄等临床资料比较，差异均无统计学意义。

　　1.2方法

　　1.2.1分组

　　采用前瞻性临床病例研究方法，对入选EBV感染患儿均于入院3d内抽取EBV抗体，进行肝肾功能、心肌酶、免疫全套（血清免疫球蛋白和补体）、淋巴细胞免疫功能、EBV-DNA定量等项检查；对入选的正常儿童，均在征得其家长同意后进行血清免疫球蛋白和补体及淋巴细胞免疫功能检查。

　　1.2.2指标测定

　　采用德国PARTEC流式细胞仪和全自动蛋白分析仪。外周血T、B细胞亚群和NK细胞检测采用流式细胞仪检测法，检测方法：取外周静脉血1mLEDTA-K2抗凝，在每支试管中加入10μL的四标记单克隆抗体CD3-FITC/CD16+CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC和CD3-FITC／CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC，再加入100μL抗凝静脉血充分混匀，共标记30min，加固定剂30μL固定5min后，加入红细胞溶解液1mL充分溶解红细胞10～20min，加PBS缓冲液补充，用流式细胞仪计数10000～15000个淋巴细胞。血清免疫球蛋白和补体测定采用散射比浊法。免疫球蛋白测定试剂盒购自西门子医学诊断产品（上海）有限公司，MultiTESTCD3-FITC／CD16+CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC和CD3-FITC／CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC购自美国DB公司。

　　2结果

　　2.1血清免疫球蛋白和补体检测结果的比较CAEBV组、EBV-HLH组C3、C4水平低于其余３组，且C4与其余３组的差异有统计学意义（P＜0.01）；CAEBV组IgE水平高于其余4组，差异有统计学意义（P＜0.01）；EBV-HLH组IgA、IgG水平显著低于其余４组患儿，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

　　2.2外周血T、B细胞亚群和NK细胞检测结果的比较普通IM组及重症IM组CD8+比值较其他3组显著升高（P＜0.01）；EBV-HLH组总T细胞，CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK及B细胞均显著下降，差异与其余4组比较有统计学意义（P＜0.01）；CAEBV组CD4+轻度升高，但无统计学意义，CD4+/CD8+较其余EBV患儿升高，与对照组相比差异无统计学意义；B细胞较IM患儿及对照组明显降低（P＜0.05）。见表2。

　　3讨论

　　EB病毒（Epstain-Barrvirus，EBV）是一种双链DNA病毒，属于疱疹病毒科，亚科，人感染EBV后建立终身潜伏感染，人群感染率超过90％。EBV是一种重要的肿瘤相关病毒，与鼻咽癌、淋巴瘤等多种肿瘤的发生密切相关［1］。

　　在儿童，非肿瘤性EBV感染疾病主要包括传染性单核细胞增多症（infectiousmononucleosis，IM）、慢性活动性EBV感染（chronicactiveEpstein-Barrvirusinfection，CAEBV）及EBV相关噬血淋巴组织细胞增生症（Epstein-Barrvirus-re?latedhemophagocyticlymphohistiocytosissyndrome，EBV-HLH）［2］，后两种疾病是较为严重的EBV感染相关疾··465病，预后不良。

　　EBV主要通过唾液传播，也可经输血传染。原发EBV感染时，EBV首先在口咽部上皮细胞内增殖，然后感染附近的B淋巴细胞，受到感染的B淋巴细胞进入血液循环可以造成全身性感染。外周血单个核细胞（PBMC）被用来检测EBV载量，PBMC中EBV-DNA水平有助于CAEBV的诊断，EBV-DNA水平与病情严重程度和预后有关。

　　参考文献：

　　［1］谢正德，申昆玲.重视儿童非肿瘤性EB病毒感染疾病的研究［J］.首都医科大学学报，2010，31（2）：213-216.

　　［2］王群，谢正德.儿童EB病毒相关疾病的诊断标准和治疗原则［J］.实用儿科临床杂志，2010，25（10）：706-708.

　　［3］TeramuraT，TabataY，YagiT，etal.Quantitativeanalysisofcell-freeEpstein-BarrvirusgenomecopynumberinpatientswithEBV-associatedhemophagocyticlymphohistiocytosis［J］.LeukLymphoma，2002，43（4）：173-179.

　　［4］YamashitaN，KimuraH，MorishimaT.VirologicalaspectsofEpstein-Barrvirusinfections［J］.ActaMedOkayama，2005，59（6）：239-246.

　　张慧a，李双杰a，袁远宏b，康桢a，唐莲a，谭艳芳a

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